本发明涉及保健品的，更具体地说，它涉及一种蜂王浆活性成分提取工艺。
背景技术：
1、蜂王浆又称蜂乳，是幼龄工蜂头部的咽下腺和上颚腺共同分泌的一种乳白色至浅黄色浆状物。新鲜蜂王浆中含水量62.5%～70%，脂肪酸5.0%～5.7%，总糖量12%～17%和粗蛋白13%～17%，粗蛋白至少含有12种蛋白质和小分子肽类。
2、蜂王浆具有多种生物活性，如抗氧化、调节免疫以及抗菌等功效。研究表明，蛋白质和脂肪酸是蜂王浆免疫调节活性的主要功能因子，10-羟基-2-癸烯酸(10-hda)和3,10-二基癸酸(3,10-dda)对小鼠体内异源t细胞的生成有很好的抑制效果。总糖量中富含的还原糖则能够提供能量，促进生长发育，促进维生素的吸收。因此，新鲜蜂王浆是一种营养价值极高的保健品，具有较高的研究价值，但新鲜蜂王浆中活性成分的储存利用仍然是本领域的一大难题，其原因在于：还原糖与蛋白质容易发生美拉德反应，导致蛋白质变质，影响了蜂王浆的品质。
3、为了使得蜂王浆蛋白能够保持长久的活性，通常对蜂王浆蛋白进行提取分离。传统蜂王浆蛋白提取纯化方法有透析、多次层析等方式，上述方式所需要的时间长，成本高，虽然所得产品的纯度高，但不适合规模化生产。因此，如何能够高效分离新鲜蜂王浆的三大营养成分，得到高纯度和高收率的蜂王浆活性成分仍然是本领域的一大难题。
技术实现思路
1、为了解决新鲜蜂王浆活性成分难以高效分离提取的问题，本申请提供一种蜂王浆活性成分提取工艺。
2、本申请提供一种蜂王浆活性成分提取工艺，采用如下的技术方案：
3、一种蜂王浆活性成分提取工艺，包括如下步骤：
4、稀碱沉淀分离：将新鲜蜂王浆与水按照重量比1:(1.8～2.1)搅拌共混，加入食品碱，调节混合液的ph值为4.43～4.88，静置沉淀，过滤后得到粗沉淀混合物和一次分离液；
5、低温醇提分离：在4～10℃下，将粗沉淀混合物与乙醇溶液按照重量比1:(0.3～0.75)搅拌共混，静置溶解30～60min，过滤后得到一次粗蛋白提取物和一次粗脂肪酸提取液；
6、在4～10℃下，向一次分离液中加入乙醇进行洗涤，静置溶解30～60min，过滤得到二次粗蛋白提取物和粗还原糖提取液；将一次粗蛋白提取物和二次粗蛋白提取物合并，得到混合粗蛋白提取物；
7、混合粗蛋白提取物精制，得到活性蛋白产品；
8、低温水洗：一次粗脂肪酸提取液和粗还原糖提取液共混后浓缩，除去乙醇溶液，所得固体在4～20℃水洗，浓缩后静置分离，过滤后得到脂肪酸结晶产品和还原糖水溶液；
9、还原糖水溶液浓缩结晶，得到还原糖结晶产品。
10、通过采用上述技术方案，新鲜蜂王浆的粘度高，难以直接进行分离提取，因此，采用适量水进行溶解稀释；采用食品碱控制混合液的ph值，使得混合液的ph值靠近蛋白质的等电点，蛋白聚沉，得到粗蛋白提取物；同时，由于脂肪酸10-hda难溶于酸性溶液，脂肪酸随粗蛋白提取物共同沉淀，得到粗沉淀混合物和一次分离液；
11、粗沉淀混合物中加入乙醇溶液进行提取分离，利用10-hda等粗脂肪酸能够溶解在乙醇溶液的特性，蛋白质和10-had分离，并且短时间内乙醇对蛋白质表面氢键作用弱，对蛋白质活性影响较小；
12、并且，一次分离液中富含还原糖和脂肪酸以及少量水溶性蛋白，一次分离液采用乙醇溶液进行再次提取分离，还原糖和脂肪酸溶解在乙醇溶液中，水溶性蛋白在低温乙醇溶液中沉淀分离，有利于蛋白质的充分提取；
13、粗还原糖浓缩，除去溶剂和小分子杂质，析出大量脂肪酸结晶和还原糖结晶；利用脂肪酸难溶于水的特性，对脂肪酸结晶进行洗涤，得到高纯度和高收率的脂肪酸结晶；还原糖溶解在水中，进行精制，得到还原糖晶体。
14、综上，本申请能够直接对新鲜蜂王浆进行提取，无需以蜂王浆冻干粉作为原料，降低了提取难度，蜂王浆中的活性物质损失降低；同时，新鲜蜂王浆中活性蛋白、脂肪酸以及还原糖的分离提取操作简单，所使用的溶剂安全易得，容易实现大规模生产，生产成本低廉，活性成分的收率和纯度高；提取得到的活性成分使用时按照特定的比例混合，采用薄型子宫大鼠模型动物实验检验活性成分的功效，经过实际检验，与空白对照组相比，大鼠血清e2、p4含量显著上升，与新鲜蜂王浆对照组相比，大鼠血清e2、p4含量略微降低，降幅相差不大，证明本申请的提取方法所得的产品仍然能够具备较优功效，功效与新鲜蜂王浆相比相差不大。
15、进一步的，所述稀碱沉淀分离步骤中，新鲜蜂王浆与水的重量比为1:2。
16、进一步的，所述稀碱沉淀分离步骤中，调节混合液的ph值为4.68～4.74。
17、进一步的，食品碱为碳酸氢钠和/或碳酸钠。
18、通过采用上述技术方案，此ph值范围与粗蛋白混合物的ph值较为接近，粗蛋白的沉淀效率较高；同时，在此重量比范围内，新鲜蜂王浆能够被充分稀释，混合液粘度较低，有助于蛋白快速沉淀，一方面有助于提升产品生产效率，另一方面，蛋白受到乙醇的影响较小，蛋白结构稳定，不容易变质，从而有助于充分保留活性蛋白的生物活性。
19、进一步的，所述低温醇提分离步骤中，粗沉淀混合物与乙醇溶液按照重量比1:(0.5～0.6)共混。
20、通过采用上述技术方案，控制粗沉淀物和乙醇溶液的比例和，使得乙醇既能够充分溶解脂肪酸，又能够降低对活性蛋白的影响，降低活性蛋白不在提取分离过程中变质的可能性。
21、进一步的，所述低温醇提分离步骤中，所述混合粗蛋白提取物精制具体为：采用无水乙醇对混合粗蛋白进行洗涤，洗涤完毕后过滤，氮气吹干，得到活性蛋白产品。
22、进一步的，所述低温水洗步骤中，采用氮气吹干的方式除去乙醇溶液。
23、通过采用上述技术方案，氮气能够在常温下带走乙醇和水，安全无毒，且可循环使用。
技术特征：1.一种蜂王浆活性成分提取工艺，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的一种蜂王浆活性成分提取工艺，其特征在于：所述稀碱沉淀分离步骤中，新鲜蜂王浆与水的重量比为1:2。
3.如权利要求2所述的一种蜂王浆活性成分提取工艺，其特征在于：所述稀碱沉淀分离步骤中，调节混合液的ph值为4.68～4.74。
4.如权利要求1所述的一种蜂王浆活性成分提取工艺，其特征在于：所述食品碱为碳酸氢钠和/或碳酸钠。
5.如权利要求1所述的一种蜂王浆活性成分提取工艺，其特征在于：所述低温醇提分离步骤中，粗沉淀混合物与乙醇溶液按照重量比1:(0.5～0.6)共混。
6.如权利要求1所述的一种蜂王浆活性成分提取工艺，其特征在于：所述低温醇提分离步骤中，所述混合粗蛋白提取物精制具体为：采用无水乙醇对混合粗蛋白进行洗涤，洗涤完毕后过滤，氮气吹干，得到活性蛋白产品。
7.如权利要求1所述的一种蜂王浆活性成分提取工艺，其特征在于：所述低温水洗步骤中，采用氮气吹干的方式除去乙醇溶液。
技术总结本申请公开了一种蜂王浆活性成分提取工艺，此提取工艺中公开了稀碱沉淀分离、低温醇提分离以及低温水洗等步骤；先对新鲜蜂王浆加水稀释，用食品碱调节pH值，使得活性蛋白和脂肪酸析出，与还原糖分离；再使用乙醇洗涤粗沉淀混合物，使得活性蛋白和脂肪酸分离；活性蛋白、脂肪酸以及还原糖分别进行精制，得到高收率以及高纯度的蜂王浆活性成分产品。本申请的提取方式简单，可以直接对新鲜蜂王浆进行处理，并且处理成本低廉；本申请的提取方法所得的产品仍然能够具备较优功效。技术研发人员：徐锦忠,郭琦,吴宇翔,张倩受保护的技术使用者：江苏道思麦生物科技有限公司技术研发日：技术公布日：2024/7/29